儀器介紹

熱板裝置由一塊金屬板，微處理器控制的加熱裝置和帶蓋（有通氣孔）的透明圓柱形（直徑20 cm × 高度30cm）有機(jī)玻璃觀察室組成。顯示屏可以實(shí)時(shí)顯示金屬板的溫度。圓柱形觀察室用于將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物限制在金屬板上并防止其從設(shè)備上跳下。建議選配攝像裝置用于輔助觀察和拍攝實(shí)驗(yàn)用圖，也便于回溯分析。

智能熱板儀，型號(hào)：XR1700

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的選擇

疼痛的動(dòng)物模型受到多種調(diào)節(jié)因素的重要影響，包括性別、基因型和社會(huì)交流，在使用動(dòng)物模型時(shí)必須考慮所有這些因素。

在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的性別上，熱板測(cè)試一定要選擇雌鼠，因?yàn)樾凼笫怯胁G丸的，實(shí)驗(yàn)時(shí)陰囊的皮膚會(huì)不可避免地緊貼于金屬熱板，睪丸對(duì)熱的感受比爪子更敏感，因此產(chǎn)生了混淆效應(yīng)。而且鼠會(huì)異常暴躁，影響實(shí)驗(yàn)。疼痛研究中最-常-用的動(dòng)物是實(shí)驗(yàn)室大鼠，基本的熱板實(shí)驗(yàn)可以選擇年輕的成年雌性Sprague Dawley大鼠。但是最近將這些疼痛模型應(yīng)用于具有靶向基因突變的小鼠已被證明是一種強(qiáng)大的工具，然而，大鼠和小鼠的行為反應(yīng)可能不同。正如Mogil等人簡(jiǎn)潔地解釋的那樣，“小鼠不是小的大鼠”。如果首-次將已建立的大鼠模型應(yīng)用于小鼠，請(qǐng)務(wù)必牢記這一點(diǎn)。

對(duì)于轉(zhuǎn)基因小鼠是否可以作為疼痛模型，雖然充滿了解釋的復(fù)雜性，但是轉(zhuǎn)基因技術(shù)改變了基本的疼痛研究，即使在沒有選擇性配體或抗體的情況下，也可以研究單個(gè)蛋白質(zhì)在疼痛中的作用。這項(xiàng)技術(shù)也意味著許多實(shí)驗(yàn)室已經(jīng)從使用大鼠轉(zhuǎn)向使用小鼠了。這種轉(zhuǎn)變并非沒有代價(jià)：在許多實(shí)際方面，小鼠作為疼痛實(shí)驗(yàn)對(duì)象不如大鼠。但廣泛使用轉(zhuǎn)基因小鼠的一個(gè)幸運(yùn)結(jié)果是越來(lái)越關(guān)注遺傳背景對(duì)疼痛敏感性的影響。

測(cè)試流程

1、實(shí)驗(yàn)材料

1)最佳年齡的小鼠或大鼠（一般是6至8周）。

2)測(cè)試藥物和溶劑對(duì)照。

3)熱板裝置（可配備表面溫度計(jì)，用于校準(zhǔn)和維護(hù)設(shè)備）。

2、適應(yīng)

1)將動(dòng)物從飼養(yǎng)室轉(zhuǎn)移到實(shí)驗(yàn)室，稱重并記錄，讓動(dòng)物適應(yīng)實(shí)驗(yàn)室環(huán)境至少半小時(shí)。

2)設(shè)置金屬板溫度與測(cè)試室的溫度匹配并清潔測(cè)試板表面。

3)將單個(gè)受試者動(dòng)物放入測(cè)試小室中，不受干擾地探索15分鐘。

4)取出動(dòng)物并清潔板表面的任何尿液或糞便。

3、測(cè)試

1)將熱板溫度設(shè)置為測(cè)試溫度，范圍通常在 50 °C～56 °C之間。

2)一旦達(dá)到預(yù)設(shè)溫度，將適應(yīng)好的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物放在熱板上。

3)測(cè)量第一次出現(xiàn)傷害反應(yīng)（例如，舔足，后爪抬起或跳躍）的潛伏期。設(shè)置終止時(shí)間，例如給藥后，動(dòng)物沒有明顯的傷害感受反應(yīng)，則必須在提前規(guī)定的終止時(shí)間后將動(dòng)物從熱板上移開，以免對(duì)動(dòng)物造成組織損傷。

4)出于倫理原因，出現(xiàn)傷害反應(yīng)后應(yīng)快速將動(dòng)物從測(cè)試表面上移開，以避免不必要的痛苦和/或組織損傷。

5)將測(cè)試過(guò)的動(dòng)物放入與未測(cè)試的動(dòng)物分開的籠子中。大/小鼠可以通過(guò)各種嗅覺和超聲波系統(tǒng)進(jìn)行交流，這可能是焦慮和恐懼的來(lái)源。

6)將測(cè)試板溫度恢復(fù)到室溫，并清潔金屬板的表面。

4、測(cè)試多種溫度

如果在多個(gè)溫度下測(cè)試相同的小鼠，則應(yīng)將測(cè)試分開至少24小時(shí)，以避免壓力和重復(fù)測(cè)試對(duì)潛伏期時(shí)間的影響。

注意事項(xiàng)

1.可以預(yù)選30 s內(nèi)有疼痛反應(yīng)的動(dòng)物進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，將逃避、跳躍等不安定的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物剔除。

2.實(shí)驗(yàn)前一定要讓動(dòng)物適應(yīng)環(huán)境和裝置，暴露于新環(huán)境可能會(huì)掩蓋或改變潛伏期數(shù)據(jù)。

3.每只動(dòng)物測(cè)試結(jié)束后一定要清潔金屬板，因?yàn)楹笞ι系哪蛞夯蚣S便可能會(huì)改變測(cè)試板的傳熱特性，同時(shí)避免上一只動(dòng)物的氣味對(duì)下一只測(cè)試動(dòng)物的影響。

4.傷害性反應(yīng)包括前爪縮回或舔舐，但不建議使用前爪的反應(yīng)作為觀察指標(biāo)，因?yàn)榍白νǔ⑴c梳理和探索行為，并且與金屬表面的接觸不一致。后爪縮回或舔舐被認(rèn)為是傷害感受的更可靠指標(biāo)。不過(guò)，簡(jiǎn)單的后爪抬起也可能是由于梳理和探索。

5.不建議短時(shí)間內(nèi)重復(fù)測(cè)試。在有害甚至無(wú)害的溫度下反復(fù)暴露于熱板測(cè)試可能降低行為反應(yīng)的潛伏期。

在未加熱時(shí)對(duì)小鼠的“正常”行為進(jìn)行觀測(cè)是必要的，以便可以注意到傷害性測(cè)試期間行為的任何差異。同樣重要的是要注意是否有任何其他因素可能影響疼痛行為，例如梳理、睡覺、排便或因噪音或光線水平的變化而分散注意力。